如何来设计引物

1、引物长度：15-30bp为宜，常用20bp左右

2、引物扩增跨度：以200-500为宜

3、引物碱基：G+C含量以40%-60%为宜，太少扩增效果不佳，过多易出现非特异性条带。ATGC最好随机分布。

4、避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端，容易出现引物二聚体，产生非特异性条带

5、引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基要严格配对，以免末端碱基不配对导致PCR失败

6、引物中加入合适的酶切位点

7、引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其他程序无明显同源性